1. [单选题]ELISA双抗体夹心法一步法检测中,若怀疑存在钩状效应,应采取
A. 降低孵育温度
B. 缩短孵育时间
C. 增加酶标抗体的含量
D. 增加洗板次数
E. 将标本稀释后重新检测
2. [多选题]影响抗原抗体反应的因素有( )
A. 振荡
B. 温度
C. pH
D. 渗透量
E. 电解质
1.正确答案 :E
解析:在双抗体夹心法一步法中,当待测抗原浓度过高时,过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成,出现钩状效应,只有将标本稀释后重新检测才有可能得到准确的试验结果。
2.正确答案 :BCE
解析:(一)抗原和抗体浓度、比例 抗原和抗体浓度、比例对抗原抗体反应影响最大,是决定性因素(二)电解质 抗原与抗体特异性结合后,其亲水性减弱,分子表面所带的电荷易受电解质影响而失去,复合物间的排斥力下降,导致第一阶段已形成的可溶性结合物能进一步联结,出现明显的凝集或沉淀现象。试验中常用0.85%的NaCl溶液作为稀释液,以提供适当浓度的电解质。 (三)温度 适当的温度可增加抗原与抗体分子碰撞的机会,加速结合物体积的增大,一般而言温度越高,形成可见反应的速度越快,但过高则会使抗原或抗体变性失活,影响试验结果。一般在37℃下进行试验,但也有些抗原抗体在4℃下进行反应较好。 (四)酸碱度 pH过高或过低都将直接影响抗原或抗体的理化性质。例如,当pH降至3.0左右时,因接近细菌抗原的等电点,细菌表面蛋白或其他基团所带的电荷消失,其相互间的排斥力丧失而导致非特异性酸凝集,影响试验的可靠性。
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